譯者的話

前言

參編者

推薦的背景讀物

第1章 蛋白質純化和定性的策略

1.1 單元 蛋白質純化和定性概述

目標和研究對象

蛋白質純化的原料

蛋白質的檢測和分析

蛋白質分離和純化方法

蛋白質產(chǎn)物的定性

蛋白質純化實驗室

1.2 單元 蛋白質純化流程圖

可溶性重組蛋白

不可溶性重組蛋白

可溶性非重組蛋白

膜相關的和不可溶性重組蛋白

第2章 計算分析

2.1 單元 用于蛋白質序列分析的疏水分布圖

方法學

應用

結論

2.2 單元 蛋白質二級結構預測

二級結構預測的方法

二級結構預測方法的應用

2.3 單元 使用BLAST程序家族進行序列相似性搜索

進入BLAST程序和文檔

BLAST介紹

BLAST程序

2.4 單元 因特網(wǎng)上的蛋白質數(shù)據(jù)庫

蛋白質結構數(shù)據(jù)庫

蛋白質家族數(shù)據(jù)庫

2.5 單元 蛋白質三級結構預測

同源性建模

序列分布圖法

線程法

從頭結構預測

2.6 單元 蛋白質三級結構建模

詞匯

進入SwissModel程序和文檔

ExPDB數(shù)據(jù)庫

創(chuàng)建首次法建模查詢的格式

觀看SwissModel結果

2.7 單元 比較蛋白質結構預測

比較建模的步驟

第3章 檢測和分析方法

3.1 單元 分光光度法確定蛋白質濃度

基本方案1 計算一個蛋白質的摩爾吸收系數(shù)

基本方案2 折疊蛋白質摩爾吸收系數(shù)的測定

基本方案3 使用摩爾吸收系數(shù)通過吸收光譜測定蛋白質的濃度

基本方案4 通過205nm處的吸收光譜測定蛋白質的濃度

基本方案5 粗蛋白質提取液總蛋白質濃度的測定

3.2 單元 定量氨基酸分析

樣品制備

平均組成的計算

3.3 單元 肽和蛋白質的體外放射標記

基本方案1 使用碘珠對酪氨酸或組氨酸殘基進行碘化

備擇方案1 用氯胺T或Iodogen在酪氨酸或組氨酸殘基碘化

備擇方案2 使用乳酸過氧化物酶在酪氨酸或組氨酸殘基碘化

輔助方案1 等摩爾碘化以獲得產(chǎn)物的高收率

輔助方案2 用HPLC從碘化產(chǎn)物中分離未標記的肽

基本方案2 用Bolton-Hunter試劑在賴氨酸殘基或N端碘化

基本方案3 通過酸酐乙酰化在賴氨酸殘基或N端進行14C或3H標記

備擇方案3 通過還原性烷基化在賴氨酸殘基或N端進行14C或3H標記

備擇方案4 用碘乙酸或碘乙酰胺在賴氨酸殘基進行14C或3H標記

基本方案4 在肽合成過程中引入標記的氨基酸殘基

備擇方案5 在肽合成過程中在N端進行選擇性標記

3.4 單元 總蛋白質的分析

基本方案1 總蛋白質定量的雙縮脲分析

基本方案2 總蛋白質定量的Hartree-Lowry分析

基本方案3 總蛋白質定量的二喹啉甲酸(BCA)分析

基本方案4 總蛋白質定量的酸消化——茚三酮法

輔助方案1 熱封玻璃管

基本方案5 測量總蛋白質的考馬斯染料結合分析(Bradford分析)

輔助方案2 蛋白質樣品的凝膠透析

……

第4章 提取、穩(wěn)定和濃縮

第5章 重組蛋白的生產(chǎn)

第6章 重組蛋白的純化

第7章 重組蛋白的定性

第8章 常規(guī)層析分離

第9章 親和層析

第10章 電泳

第11章 化學分析

第12章 翻譯后修飾：糖基化

第13章 翻譯后修飾：磷酸化和磷酸酶

第14章 翻譯后修飾：特定的應用

第15章 蛋白質的化學修飾

第16章 質譜

第17章 肽的制備和處理

第18章 蛋白質互相作用的鑒定

第19章 蛋白質相互作用的定量

第20章 肽酶

第21章 基于凝膠的蛋白質組分析

附錄1 試劑和溶液

附錄2 常用的度量制和數(shù)據(jù)

附錄3 常用技術

附錄4 試劑和設備供貨商

參考文獻

索引